在免疫细胞培养时,需采集人外周血,分离血浆及PBMC,经过体外细胞因子及培养液的扩增,得到符合临床要求的免疫细胞。
灏洋实验室一直致力于为客户提供高品质的培养液产品及方案。在进行血浆处理时,添加钙离子可使促使血浆释放多种细胞因子,有利于淋巴细胞的培养。
Ø操作方法
1.获得人抗凝外周血或脐带血(50 ml以上),于2-4 h内进行分离操作。
2.在高效离心管中加入15 ml样本密度分离液(TBD,货号HY2015),抗凝血(20-25 ml)缓慢加入至分离液上方,使之形成明显的分层界面。600 g慢升慢降离心30 min。
3.用吸管小心从上至下分别取出血浆层、PBMC白环层。
4. 血浆中加入8%体积的葡萄糖酸钙溶液,反复冻融3次,离心去掉沉淀,上清液可用于细胞培养(对照组血浆56℃灭活30 min)。
5.按照人NK细胞体外培养实验方案(TBD,货号TBDNK2013-S)继续培养。
Ø实验结果
实验组NK细胞增殖数量相比对照组提高5%-10%。(平均数据)。
Ø实验结论
建议客户处理血浆时,添加葡萄糖酸钙溶液,有利于NK细胞收获的质量。